Informasi

Kanker mana yang secara rutin diobati dengan terapi anti-angiogenik?

Kanker mana yang secara rutin diobati dengan terapi anti-angiogenik?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Saya telah diminta untuk mendiskusikan 2 dari kanker ini dan bagaimana terapi tersebut digunakan. Saya memahami angiogenesis dan perannya dalam perkembangan tumor, tetapi membutuhkan bantuan dalam menjelaskan bagaimana terapi digunakan.


Dengan asumsi Anda bermaksud "Angiogenesis" bukan "Antiogenesis" ...

Dari wikipedia > penghambat angiogenesis

Inhibitor angiogenesis pernah dianggap memiliki potensi sebagai pengobatan "peluru perak" yang berlaku untuk banyak jenis kanker, tetapi keterbatasan terapi anti-angiogenik telah ditunjukkan dalam praktik.2 Meskipun demikian, inhibitor digunakan untuk mengobati kanker secara efektif, degenerasi makula pada mata, dan penyakit lain yang melibatkan proliferasi pembuluh darah

Anda pasti harus melihat halaman web ini dari National Cancer Institute.

Angiogenesis memainkan peran penting dalam pertumbuhan dan penyebaran kanker. Suplai darah diperlukan agar tumor tumbuh melebihi ukuran beberapa milimeter. Tumor dapat menyebabkan suplai darah ini terbentuk dengan mengeluarkan sinyal kimia yang merangsang angiogenesis. Tumor juga dapat merangsang sel normal di dekatnya untuk menghasilkan molekul sinyal angiogenesis. Pembuluh darah baru yang dihasilkan "memberi makan" tumor yang sedang tumbuh dengan oksigen dan nutrisi, memungkinkan sel kanker menyerang jaringan di dekatnya, bergerak ke seluruh tubuh, dan membentuk koloni baru sel kanker, yang disebut metastasis.

Badan Pengawas Obat dan Makanan AS (FDA) telah menyetujui bevacizumab [penghambat angiogenesis] untuk digunakan sendiri untuk glioblastoma yang belum membaik dengan perawatan lain dan untuk digunakan dalam kombinasi dengan obat lain untuk mengobati kanker kolorektal metastatik, beberapa sel non-kecil kanker paru-paru, dan kanker sel ginjal metastatik


Kesinambungan perawatan dengan terapi anti-angiogenik pada kanker kolorektal metastatik

Penghambatan angiogenesis tumor telah muncul sebagai komponen terapeutik penting dalam pengelolaan kanker kolorektal metastatik. Tiga agen anti-angiogenik saat ini disetujui dalam pengaturan klinis ini: bevacizumab, ziv-aflibercept, dan regorafenib. Bevacizumab, antibodi monoklonal yang menargetkan ligan penggerak angiogenesis faktor pertumbuhan endotel vaskular A (VEGF-A), adalah satu-satunya agen anti-angiogenik yang disetujui dalam terapi lini pertama untuk kanker kolorektal metastatik, di mana ia dapat digunakan dalam kombinasi dengan intravena Regimen kemoterapi yang mengandung 5-fluorouracil. Dalam hubungannya dengan kemoterapi lini kedua, bevacizumab juga memiliki aktivitas anti-kanker, baik untuk pengelolaan kanker kolorektal metastatik pada pasien yang menerimanya sebagai bagian dari terapi lini pertama mereka dan bagi mereka yang naïve terhadapnya. Ziv-aflibercept juga telah menunjukkan aktivitas klinis dalam hubungannya dengan rejimen kemoterapi FOLFIRI dalam manajemen lini kedua pasien dengan kanker kolorektal metastatik. Ini berfungsi dengan mengikat VEGF-A ke protein faktor pertumbuhan endotel vaskular VEGF-B dan PIGF (faktor pertumbuhan plasenta) . Regorafenib, yang menghambat beberapa tirosin kinase, termasuk reseptor VEGF, telah membuktikan manfaat klinis dalam pengelolaan pasien dengan kanker kolorektal metastatik yang refrakter terhadap semua terapi lain. Untuk pasien yang kankernya refrakter terhadap semua terapi lain, ada juga bukti penggunaan bevacizumab dengan monoterapi fluoropyrimidine, tetapi hanya pada subset pasien bevacizumab-naïve. Saat ini, tidak jelas apakah salah satu agen sebagai lebih banyak aktivitas dalam lini terapi tertentu daripada yang lain, memiliki kemanjuran yang lebih besar ketika dipasangkan dengan tulang punggung kemoterapi tertentu, atau jika subset pasien tertentu lebih mungkin mendapat manfaat dari agen-agen ini. Mengingat manfaat dan data toleransi saat ini, agen anti-angiogenik harus dipertimbangkan di semua lini terapi dalam pengelolaan kanker kolorektal metastatik, dengan bukti penggunaan agen ini di setiap lini terapi spesifik dan dalam kombinasi kemoterapi spesifik yang mendorong pemilihan agen.


Pengantar

Selama dekade terakhir, inhibitor pos pemeriksaan imun (ICI) telah merevolusi lanskap pengobatan kanker stadium lanjut. ICIs meremajakan sel T sitotoksik (CTL) yang disfungsional atau kelelahan untuk mengerahkan fungsi efektor anti-tumor yang kuat, sehingga memungkinkan kontrol yang efektif dan tahan lama terhadap kanker yang sebelumnya sulit disembuhkan 1,2,3 . Namun, terlepas dari kemajuan ini, hanya 20-30% pasien dengan kanker yang merespon pengobatan ICI, dan sulit untuk memprediksi responden ini sebelum pengobatan karena sistem kekebalan terlalu kompleks untuk ditafsirkan dengan biomarker tunggal. Di antara berbagai penentu kekebalan kanker, lingkungan mikro tumor (TME) berfungsi sebagai hambatan utama yang sangat merusak kemanjuran ICIs 2,4 . Dalam TME, interaksi antara pembuluh tumor dan sel imun protumoral menghasilkan lingkaran setan yang sangat mengganggu kekebalan anti-kanker dan mendorong perkembangan tumor. Pembuluh darah tumor yang abnormal mendorong penghindaran sel imun protumoral, yang pada gilirannya mendukung angiogenesis tumor 2,5,6,7 . Crosstalk imun-vaskular yang menyimpang ini tidak hanya menghasilkan penghalang endotel yang menghalangi infiltrasi sel T ke dalam tumor tetapi juga merusak fungsi efektor sel T dan bahkan menyebabkan apoptosis sel T dalam TME 2,4,8,9,10 . Dengan demikian, menargetkan pembuluh darah tumor dapat menjadi solusi potensial untuk meningkatkan kekebalan anti-kanker dan mengatasi resistensi terhadap ICI.

Di sini, kami merangkum bukti yang muncul dari regulasi timbal balik pembuluh darah dan sel kekebalan dalam TME dan memberikan alasan untuk kombinasi imunoterapi yang menargetkan pembuluh tumor dan kekebalan. Selain itu, kami menyoroti terobosan klinis utama baru-baru ini dalam imunoterapi kanker yang telah membuktikan validitas kombinasi terapi anti-angiogenik dan ICI.


Abstrak

Inhibitor angiogenesis yang menargetkan jalur pensinyalan faktor pertumbuhan endotel vaskular (VEGF) memberikan kemanjuran terapeutik yang dapat dibuktikan pada model kanker tikus dan dalam peningkatan jumlah kanker manusia. Namun, baik dalam pengaturan praklinis dan klinis, manfaatnya hanya sementara dan diikuti oleh pemulihan pertumbuhan dan perkembangan tumor. Data yang muncul mendukung proposisi bahwa dua mode resistensi tidak konvensional mendasari hasil tersebut: resistensi mengelak, adaptasi untuk menghindari blokade angiogenik spesifik dan ketidakpedulian intrinsik atau yang sudah ada sebelumnya. Berbagai mekanisme dapat digunakan dalam konteks tumor yang berbeda untuk mewujudkan resistensi mengelak dan intrinsik, memotivasi penilaian prevalensi dan kepentingannya dan pada gilirannya desain strategi farmakologis yang memberikan terapi anti-angiogenik yang bertahan lama.


Terapi anti-angiogenik pada kanker: pencapaian dan pertanyaan terbuka

Persetujuan pada tahun 2004 dari bevacizumab (Avastin), antibodi monoklonal penetral yang diarahkan terhadap faktor pertumbuhan endotel vaskular (VEGF) sebagai obat sistemik anti-angiogenik pertama untuk mengobati pasien kanker memvalidasi gagasan yang diperkenalkan 33 tahun sebelumnya oleh Dr. Judah Folkman, bahwa penghambatan angiogenesis tumor mungkin merupakan pendekatan yang valid untuk mengontrol pertumbuhan tumor. Terapi anti-angiogenik disambut di klinik sebagai langkah maju yang besar dalam pengobatan kanker. Pada saat yang sama, keberhasilan ini baru-baru ini mendorong bidang pencarian target dan obat anti-angiogenik baru. Terlepas dari keberhasilan ini, beberapa pertanyaan lama di lapangan tetap tidak terjawab dan pertanyaan baru telah muncul. Mereka termasuk identifikasi untuk penanda pengganti angiogenesis dan anti-angiogenesis, pemahaman tentang bagaimana terapi anti-angiogenik dan kemoterapi bersinergi, karakterisasi konsekuensi biologis dari penekanan angiogenesis berkelanjutan pada biologi tumor dan homeostasis jaringan normal, dan mekanisme tumor melarikan diri dari anti-angiogenesis. Dalam ulasan ini kami merangkum beberapa pertanyaan luar biasa ini, dan menyoroti tantangan masa depan dalam penelitian klinis, translasi dan eksperimental dalam terapi anti-angiogenik yang perlu ditangani untuk meningkatkan perawatan saat ini dan untuk merancang obat baru.


Kortikosteroid

Raja Narayanan MD , Baruch D. Kuppermann MD, PhD , dalam Farmakoterapi Retina , 2010

DEGENERASI MACULAR TERKAIT USIA (AMD) EXUDATIVE

Sifat antiangiogenik dari triamcinolone acetonide telah dipelajari dalam pengobatan AMD eksudatif. 31 , 32 Berbagai penelitian yang tidak terkontrol telah dilakukan.

Dalam studi intervensi klinis prospektif, komparatif nonrandomized oleh Jonas et al., Semua pasien telah menunjukkan peningkatan atau stabilisasi ketajaman visual setelah injeksi intravitreal pertama 25 mg triamcinolone acetonide. 32 Dalam studi tersebut, ketajaman visual rata-rata meningkat secara signifikan (P = 0,005 dan P = 0,003, masing-masing) dari 0,17 hingga 0,32 dan dari 0,15 hingga 0,23, masing-masing, setelah suntikan pertama dan kedua. Peningkatan ketajaman visual ditemukan untuk 10 pasien (77%) setelah suntikan pertama dan kedua. Pada kelompok kontrol, ketajaman visual tidak bervariasi secara signifikan selama masa tindak lanjut (P = 0,81). Puncak ketajaman visual dan, secara kronologis paralel, puncak peningkatan TIO terjadi 2-5 bulan setelah setiap injeksi.

Dalam penelitian lain, 67 pasien (71 mata) yang datang dengan AMD eksudatif tipe predominan atau total okultisme (n = 68) atau tipe klasik (n = 3) menerima injeksi intravitreal kristal triamcinolone acetonide 25 mg. Ketajaman visual meningkat secara signifikan (P < 0,001) dari 0,16 hingga rata-rata maksimum 0,23. Ketajaman visual pasca injeksi tertinggi 1-3 bulan setelah injeksi. Empat puluh tujuh (66,2%) mata diperoleh dalam ketajaman visual maksimal dan 11 (15,5%) mata hilang dalam ketajaman visual. TIO meningkat secara signifikan (P < 0,001 dari 15,1 mmHg pada awal hingga nilai maksimal 23,0 mmHg. Karena penurunan ketajaman visual setelah peningkatan awal, 6 pasien menerima injeksi triamcinolone acetonide intravitreal kedua, setelah itu ketajaman visual meningkat lagi di tiga mata. 33

Uji klinis acak dari injeksi tunggal 4 mg triamcinolone acetonide dilakukan pada 27 pasien yang ditindaklanjuti selama 6 bulan. Studi oleh Danis et al. 14 termasuk AMD eksudatif dengan CNV subfoveal atau okultisme, dan ketajaman visual antara 20/40 dan 20/400. Ketajaman visual secara signifikan lebih baik pada kelompok perlakuan dibandingkan dengan subyek kontrol pada 3 dan 6 bulan (P < 0,005). Peningkatan TIO terlihat pada 25% pasien yang diobati, tetapi dikendalikan dengan obat topikal. Perkembangan katarak lebih sering terlihat pada kelompok yang diobati.

Uji klinis acak tersamar ganda, terkontrol plasebo, dilakukan oleh Gillies et al. 34 pada pasien dengan CNV selama kurang dari 1 tahun, dan ketajaman visual 20/200 atau lebih baik. Injeksi intravitreal 4 mg tunggal diberikan. Sebanyak 151 mata diacak ke dalam penelitian, dan data tindak lanjut diperoleh untuk 73 (97%) dari 75 mata pada kelompok perlakuan dan untuk 70 (92%) dari 76 mata pada kelompok kontrol. Menggunakan kehilangan penglihatan yang parah (30 huruf) sebagai ukuran hasil utama, Gillies et al. menemukan bahwa tidak ada perbedaan antara kedua kelompok selama tahun pertama penelitian. Selain itu, meskipun perubahan ukuran membran neovaskular secara signifikan lebih sedikit pada mata yang menerima triamcinolone acetonide dibandingkan pada mereka yang menerima plasebo 3 bulan setelah pengobatan (P = 0,01), tidak ada perbedaan yang dicatat setelah 12 bulan. Setelah 12 bulan, mata yang dirawat memiliki risiko peningkatan TIO secara signifikan yang ditentukan oleh peningkatan 5 mmHg atau lebih (31/75 (41%) dibandingkan 3/76 (4%) P < 0,001), tetapi bukan dari perkembangan katarak (P = 0,29). 34 Saat ini, kortikosteroid memiliki peran utama yang sangat terbatas dalam pengelolaan AMD neovaskular. Sebelum munculnya agen anti-VEGF untuk AMD neovaskular, triamcinolone intravitreal sering digunakan dalam kombinasi dengan terapi fotodinamik (PDT) untuk pengobatan CNV yang terkait dengan AMD. 35-38 Baru-baru ini, Augustin dan lainnya 39, 40 telah mengusulkan penggunaan deksametason intravitreal dalam kombinasi dengan terapi PDT dan anti-VEGF untuk memberikan apa yang disebut "terapi rangkap tiga" untuk CNV/AMD. Selain itu, penelitian yang melihat implan pengiriman obat berbasis steroid seperti Ozurdex dalam kombinasi dengan terapi anti-VEGF sedang berlangsung. Namun, steroid sebagai terapi tunggal untuk CNV/AMD saat ini tidak dianggap sebagai pilihan yang layak.


Kanker mana yang secara rutin diobati dengan terapi anti-angiogenik? - Biologi

Semua artikel yang diterbitkan oleh MDPI segera tersedia di seluruh dunia di bawah lisensi akses terbuka. Tidak diperlukan izin khusus untuk menggunakan kembali seluruh atau sebagian artikel yang diterbitkan oleh MDPI, termasuk gambar dan tabel. Untuk artikel yang diterbitkan di bawah lisensi Creative Common CC BY akses terbuka, setiap bagian dari artikel dapat digunakan kembali tanpa izin asalkan artikel aslinya dikutip dengan jelas.

Makalah Fitur mewakili penelitian paling maju dengan potensi signifikan untuk dampak tinggi di lapangan. Makalah Fitur diajukan atas undangan individu atau rekomendasi oleh editor ilmiah dan menjalani tinjauan sejawat sebelum dipublikasikan.

Makalah Fitur dapat berupa artikel penelitian asli, studi penelitian baru yang substansial yang sering melibatkan beberapa teknik atau pendekatan, atau makalah tinjauan komprehensif dengan pembaruan singkat dan tepat tentang kemajuan terbaru di bidang yang secara sistematis mengulas kemajuan paling menarik dalam bidang ilmiah. literatur. Jenis makalah ini memberikan pandangan tentang arah penelitian di masa depan atau kemungkinan penerapannya.

Artikel Pilihan Editor didasarkan pada rekomendasi dari editor ilmiah jurnal MDPI dari seluruh dunia. Editor memilih sejumlah kecil artikel yang baru-baru ini diterbitkan dalam jurnal yang mereka yakini akan sangat menarik bagi penulis, atau penting dalam bidang ini. Tujuannya adalah untuk memberikan gambaran tentang beberapa karya paling menarik yang diterbitkan di berbagai bidang penelitian jurnal.


Kanker mana yang secara rutin diobati dengan terapi anti-angiogenik? - Biologi

Semua artikel yang diterbitkan oleh MDPI segera tersedia di seluruh dunia di bawah lisensi akses terbuka. Tidak diperlukan izin khusus untuk menggunakan kembali seluruh atau sebagian artikel yang diterbitkan oleh MDPI, termasuk gambar dan tabel. Untuk artikel yang diterbitkan di bawah lisensi Creative Common CC BY akses terbuka, setiap bagian dari artikel dapat digunakan kembali tanpa izin asalkan artikel aslinya dikutip dengan jelas.

Makalah Fitur mewakili penelitian paling maju dengan potensi signifikan untuk dampak tinggi di lapangan. Makalah Fitur diajukan atas undangan individu atau rekomendasi oleh editor ilmiah dan menjalani tinjauan sejawat sebelum dipublikasikan.

Makalah Fitur dapat berupa artikel penelitian asli, studi penelitian baru yang substansial yang sering melibatkan beberapa teknik atau pendekatan, atau makalah tinjauan komprehensif dengan pembaruan singkat dan tepat tentang kemajuan terbaru di bidang yang secara sistematis mengulas kemajuan paling menarik dalam bidang ilmiah. literatur. Jenis makalah ini memberikan pandangan tentang arah penelitian di masa depan atau kemungkinan penerapannya.

Artikel Pilihan Editor didasarkan pada rekomendasi dari editor ilmiah jurnal MDPI dari seluruh dunia. Editor memilih sejumlah kecil artikel yang baru-baru ini diterbitkan dalam jurnal yang mereka yakini akan sangat menarik bagi penulis, atau penting dalam bidang ini. Tujuannya adalah untuk memberikan gambaran tentang beberapa karya paling menarik yang diterbitkan di berbagai bidang penelitian jurnal.


Bahan dan metode

Talidomid

Thalidomide (Thal) yang larut dalam air dibeli dari A.G. Scientific (cat. no. T 1020). Thal (100 μg) dilarutkan dalam air suling steril dan dimasukkan ke dalam tabung Eppendorf standar dengan jumlah 500 μl untuk pengujian harian. Aliquot ini disimpan di �ⶬ sampai digunakan.

Garis sel dan kondisi kultur sel in vitro

Sel kanker payudara 4T1 dan sel 4THM (4T1 Heart Metastases Post Capsaicin), garis sel yang diperoleh dari sel kanker payudara 4T1 yang ditransplantasikan secara ortotopik, digunakan dalam penelitian ini. Garis sel adalah hadiah dari Dr Nuray Erin (Universitas Akdeniz, Fakultas Kedokteran, Antalya, Turki). Sel ditumbuhkan sebagai kultur penganut monolayer dalam cawan petri kultur sel plastik (BD, Bedford, MA, USA) di DMEM-F12 (Biochrom, Jerman) yang dilengkapi dengan 5% serum janin sapi (FBS), 2 mM L-glutamin, 1 mM natrium piruvat dan 0,02 mM asam amino non-esensial. Garis sel dipertahankan pada 37ⶬ dalam atmosfer yang dilembabkan dengan 5% CO2. Semua garis sel yang digunakan dalam penelitian ini diuji dan terbukti bebas dari kontaminasi mikoplasma.

Pengobatan talidomid

Untuk menguji efek Thal, terapi radiasi (RT) dan terapi kombinasi (Thal + RT) pada pertumbuhan sel in vitro, percobaan awal dilakukan untuk menentukan kondisi perawatan sel yang optimal.

Untuk menentukan jumlah sel yang optimal, sel 4T1 dan 4THMp disepuh dengan kepadatan 1.000 hingga 20.000 sel/sumur. Tiga puluh enam jam setelah pelapisan, sel-sel diperlakukan dengan Thal pada konsentrasi 2,5, 5, 10, 20 dan 40 μg/ml. Empat jam setelah pengobatan Thal, sel-sel diiradiasi dengan dosis tunggal radiasi pengion. Setelah iradiasi, sel-sel diinkubasi selama 24, 48 atau 72 jam, setelah itu pertumbuhan sel ditentukan. Kepadatan sel optimal ditemukan 5.000 sel/sumur.

Terapi radiasi

Untuk menentukan dosis RT yang tepat, percobaan awal dilakukan dengan menggunakan berbagai dosis radiasi pengion. Sel diunggulkan pada 5.000 sel / sumur di piring 96-sumur. Setelah 36 jam, media diganti dengan media segar yang mengandung 1% serum, dan RT diterapkan pada dosis 5 hingga 45 Gy. Setiap pelat sel (tebal 2 cm) disinari dalam unit teleterapi Co-60 pada jarak 100 cm. Untuk mencapai dosis yang homogen (+2,5%) pada pelat sel, pelat dibenamkan dalam bahan bolus ekivalen air dan bahan bolus setebal 0,5 cm ditambahkan pada penutup. Viabilitas sel diukur 24, 48 atau 72 jam setelah RT. Dosis penyinaran yang optimal ditemukan adalah 45 Gy pada 1,5 cm (di tengah piring), dilakukan pada laju dosis � cGy/menit.

Penentuan viabilitas sel

Pertumbuhan sel ditentukan setelah 72 jam inkubasi dalam tiga set percobaan: sel yang diobati dengan Thal saja pada konsentrasi 40 μg/ml, sel yang diobati dengan RT dengan dosis 45 Gy, dan sel yang diobati dengan terapi kombinasi 40 μg/ml Thal + 45 Gy radiasi pengion, diterapkan 4 jam setelah perawatan Thal. Sebagai kontrol negatif untuk semua pengujian, sel 4T1 dan 4THMp diperlakukan dengan media terkondisi yang mengandung 1% serum.

Proliferasi sel 4T1 dan 4THMp pertama kali ditentukan menggunakan senyawa tetrazolium 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulphophenyl)-2H-tetrazolium, inner garam (MTS) sesuai dengan instruksi pabriknya (Cell Titer 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay Promega Corp., Madison, WI, USA). Pembentukan formasan diukur pada optical density (OD) dari 490 nm dan dibandingkan antar kelompok untuk menentukan pertumbuhan sel dan viabilitas. Untuk menghitung persentase hambatan pertumbuhan digunakan rumus sebagai berikut: hambatan pertumbuhan (%) = [(nilai OD rata-rata kelompok kontrol - nilai rata-rata OD kelompok perlakuan)/nilai rata-rata OD kelompok kontrol] × 100%.

Untuk memverifikasi hasil uji MTS, kit viabilitas/sitotoksisitas Hidup/Mati untuk sel mamalia (Invitrogen, Eugene, OR, USA) digunakan. Menurut protokol pabrikan, sel 4T1 dan 4THMp diwarnai secara ganda dengan dua probe berlabel fluoresensi yang memungkinkan penentuan sel hidup dan mati secara simultan dalam sampel: Calcein AM, yang menodai sel hidup karena hanya berfluoresensi ketika dibelah oleh intraseluler esterases, dan EthD-1, yang mengidentifikasi sel-sel mati/sekarat karena secara eksklusif memasuki sel-sel dengan membran yang rusak. Intensitas fluoresensi diukur pada Pembaca Pelat Multilabel Victor™ X2 (PerkinElmer Inc., Waltham, MA, USA) pada panjang gelombang eksitasi 560 dan 535 nm dan panjang gelombang emisi 645 dan 610 nm, masing-masing untuk masing-masing pewarna reagen. Percobaan diulang lima kali di empat sumur replika. Data dari empat eksperimen independen yang sangat dapat direproduksi dikumpulkan dan digunakan untuk perbandingan statistik menggunakan uji-t Student.

Jumlah sel mati serta jumlah sel total dalam garis sel 4T1 dan 4THMp diperiksa lebih lanjut menggunakan uji eksklusi trypan blue (0,4% trypan blue dalam HBSS). Gambar diambil di bawah mikroskop fase kontras. Persentase penurunan kelangsungan hidup sel dihitung menurut hasil dari empat percobaan independen yang sangat dapat direproduksi. Rumus berikut digunakan: untuk RT, 100 - [no. sel hidup dalam kelompok RT yang dirawat (45 Gy RT)/tidak. sel hidup dalam kelompok kontrol yang tidak diberi perlakuan] × 100 untuk Thal, 100 -[no. sel hidup pada kelompok perlakuan (40 μg/ml Thal)/jumlah sel hidup pada kelompok kontrol yang tidak diberi perlakuan] × 100 untuk terapi kombinasi, 100 - (jumlah sel hidup pada kelompok perlakuan (40 & #x003bcg/ml Thal dan 45 Gy RT) Kelompok RT/jumlah sel hidup dalam kelompok RT yang tidak diberi perlakuan] × 100.

Penentuan level SP

Sel-sel diunggulkan dalam pelat 6-sumur dengan kepadatan 200.000 sel/sumur kemudian, 36 jam setelah pelapisan, media diganti dengan 40 μg/ml Thal dalam media yang mengandung 1% serum. Setelah 4 jam, satu kelompok pelat diiradiasi dalam media bebas serum. Media yang dikondisikan dikumpulkan 24 jam setelah iradiasi, dan SP diekstraksi menggunakan Kolom Ekstraksi Oasis (Waters Corp., Milford, MA, USA). Ekstraksi SP dari lisat sel diperiksa seperti yang dijelaskan sebelumnya tanpa menggunakan ekstraksi kolom (19). Secara singkat, 2휐 6 pelet sel 4T1 dan 4THMpc yang dimurnikan dilisiskan dengan inkubasi dalam asam asetat glasial 2% (vol/vol) pada 95ⶬ selama 45 menit. Supernatan dikeringkan dalam vakum kecepatan dan disuspensikan kembali dalam buffer sampel yang disediakan dalam kit SP EIA. Konsentrasi SP dalam media terkondisi dan lisat sel diukur dalam rangkap dua menggunakan kit EIA kompetitif yang sensitif (20 pg/ml) sesuai dengan instruksi pabrik (Substance P Enzyme Immunoassay kit cat. no. 583751 Cayman, Ann Arbor, MI, AS). Absorbansi dibaca pada 420 nm dengan pembaca lempeng mikro (Model 450 Bio-Rad, Richmond, CA, USA).

Imunopresipitasi dan Western blotting

Untuk memastikan apakah perubahan tingkat SP sel 4T1 dan 4THMpc disebabkan oleh perubahan konten SP, imunopresipitasi dan Western blotting dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya (20). Konsentrasi protein ditentukan menggunakan BCA Protein Assay (Pierce, Rockford, IL, USA). Media yang dikondisikan dipekatkan dengan Kolom Ekstraksi Oasis (Waters Corp.) untuk imunopresipitasi. Secara singkat, protein ekuivalen dari setiap sampel diinkubasi pada 4ⶬ semalaman dengan anti-SP (1:10.000) Sampel kontrol diinkubasi dengan IgG spesifik spesies non-imun. Kompleks imun dipilih dengan inkubasi pada 4ⶬ selama 6 jam dengan protein A-Sepharose CL 4B (Sigma). Selanjutnya, protein A-Sepharose disentrifugasi pada 4ⶬ selama 30 menit pada 10.000 × g. Pelet dicuci dengan PBS, disuspensikan kembali dalam buffer sampel, dan dimasukkan ke dalam gel elektroforesis gel natrium dodesil sulfat-poliakrilamida (SDS-PAGE), dan kemudian dipindahkan ke membran polivinilidena difluorida (Hybond-P Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ, USA ) menggunakan alat transfer semi-kering. Membran diblokir selama 2 jam dalam 5% susu skim dalam PBS yang mengandung 0,05% Tween-20, dan kemudian diinkubasi semalaman pada 4ⶬ dengan antibodi poliklonal kambing SP (1:200, sc-14104 Santa Cruz). Bercak tersebut kemudian diinkubasi dengan antibodi sekunder terkonjugasi HRP (1:5,000 sc-2020 Santa Cruz) dan dideteksi menggunakan reagen deteksi blotting ECL Western (ECL Plus kit Amersham Biosciences). Penanda berat molekul Ultra Low Range (M3546 Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) digunakan untuk menentukan berat molekul pita yang divisualisasikan. Jalur kontrol positif berisi SP (Sigma cat. no., 6883).

Analisis statistik

Semua data disajikan sebagai mean ± standar deviasi (SD). Analisis dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak statistik profesional (Graph Pad Software, San Diego, CA, USA). ANOVA dengan post-test dan t-test Dunnett's Multiple Comparison digunakan untuk perbandingan antarkelompok. Analisis statistik level SP dilakukan dengan menggunakan ANOVA diikuti dengan uji perbandingan ganda Tukey-Kramer atau uji-t berpasangan Student untuk persentase nilai perubahan. Grafik digambar menggunakan perangkat lunak Sigma Plot versi 10.0 (SPSS Inc., USA) dan CorelDRAW versi X4 (Corel, Co., Minneapolis, MN, USA). pπ.05 dianggap signifikan secara statistik.


DISKUSI

Angiogenesis memainkan peran utama dalam perkembangan dan progresi tumor, dan data praklinis menunjukkan bahwa penghambatan jalur pensinyalan angiogenik mungkin memiliki potensi terapeutik yang penting pada kanker lambung. Namun, uji klinis sejauh ini memberikan hasil yang kontradiktif, dan aktivitas antitumor agen antiangiogenik tidak selalu diterjemahkan ke dalam manfaat kelangsungan hidup yang signifikan. Faktor-faktor termasuk heterogenitas populasi pasien, perbedaan etnis dalam biologi tumor dan farmakogenomik, mekanisme kerja obat, tulang punggung kemoterapi dan desain penelitian dapat menjelaskan hasil variabel yang diamati dengan agen-agen ini dalam pengaturan klinis. Selanjutnya, dalam uji coba besar, tidak adanya biomarker prediktif kemungkinan akan melemahkan keuntungan kelangsungan hidup yang signifikan, yang mungkin terkait dengan penghambatan angiogenesis pada kelompok pasien tertentu.

Dalam artikel ulasan ini, kami telah berfokus pada kemanjuran klinis inhibitor antiangiogenesis pada kanker lambung. Namun, perlu digarisbawahi bahwa penilaian komprehensif peran agen ini juga harus mencakup penilaian parameter kunci seperti efektivitas biaya. Sepengetahuan kami, tidak ada analisis hemat biaya yang dilakukan pada pasien yang diobati dengan bevacizumab atau ramucirumab untuk kanker lambung stadium lanjut. Kami membayangkan bahwa, berdasarkan peningkatan kelangsungan hidup marjinal yang diamati dengan inhibitor angiogenesis pada populasi yang tidak dipilih, penyempurnaan pemilihan pasien berdasarkan stratifikasi molekuler akan sangat penting untuk memenuhi kriteria yang semakin ketat yang digunakan oleh Badan Pengatur Layanan Kesehatan dalam proses persetujuan obat.

Baru-baru ini, para peneliti dari Cancer Genome Atlas Research Network telah memberikan karakterisasi molekuler yang komprehensif dari kanker lambung.[77] Empat subtipe molekul telah diidentifikasi, dua di antaranya, tumor yang tidak stabil secara kromosom dan tumor yang stabil secara genom, masing-masing dikaitkan dengan amplifikasi berulang gen VEGF-A dan peningkatan ekspresi jalur terkait angiogenesis. Meskipun data ini belum dapat mempengaruhi strategi terapeutik untuk digunakan pada individu terpilih dalam praktik rutin, data ini dapat membantu mengungkapkan tumor mana yang lebih kecanduan jalur angiogenik teraktivasi dan karenanya lebih cocok untuk pendekatan investigasi dengan terapi berbasis antiangiogenik. Studi lebih lanjut, termasuk uji klinis prospektif dengan pengobatan dengan desain interaksi biomarker, tentu diperlukan untuk mengidentifikasi dan memvalidasi jaringan tumor atau biomarker sirkulasi yang dapat digunakan secara rutin untuk memprediksi respons pengobatan.