Informasi

Pertanyaan tentang pemotongan gen di Plasmid

Pertanyaan tentang pemotongan gen di Plasmid


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Saya merancang proposal penelitian untuk kelas. Karena menggunakan mikroinjeksi untuk mengatur gen dalam C. elegans, urutan plasmid pCFJ104 - Pmyo-3::mCherry::unc-54 telah dipilih. Tetapi karena plasmid sudah memiliki unc-54, saya bertanya-tanya apakah ada cara untuk memotong unc-54 dari plasmid?


Mengikuti tautan yang Anda berikan mengonfirmasi bahwa C. elegan vektor ekspresi akan mengekspresikan sisipan pilihan Anda dalam sel otot faring hewan transgenik (didorong oleh myo-3 promotor).

Dari memeriksa dua gambar peta pembatasan plasmid pada halaman yang Anda tautkan, saya menyimpulkan bahwa a kantong x XbaI intisari ganda harus memotong sisipan mCherry, dan cocok untuk sub-kloning fragmen pilihan Anda.

Namun Anda perlu mengkonfirmasi ini sendiri. Secara umum, saya pikir sangat tidak mungkin Anda akan menemukan individu di Biology SE yang dapat memberikan informasi yang tepat seperti "situs enzim apa yang harus saya gunakan untuk percobaan subkloning saya."

Pendekatan umum adalah untuk

  1. Penelitian untuk mengetahui apakah Anda dapat memperoleh file fasta yang berisi urutan DNA lengkap dari plasmid awal.

  2. Cari GenBank untuk melihat apakah ada catatan yang berisi anotasi untuk urutan plasmid awal--yang akan memberi tahu Anda titik awal dan titik akhir dari setiap wilayah fungsional.

  3. Jika plasmid tidak ada dalam database urutan, coba gunakan urutan dalam pencarian BLAST dari database urutan Non-redundan. Dalam contoh ini Anda akan mendapatkan hit skor tinggi di unc-54 gen, itu myo-3 gen, gen mCherry, gen beta-laktamase dari pMB9/pBR322/pUC, dan E. coli lacZ gen (antara lain).

  4. Anda juga harus berkonsultasi dengan publikasi asli (jika ada) karena mungkin berisi informasi tambahan yang berguna, termasuk cara menghubungi penulis--yang mungkin memiliki file urutan, peta yang berguna, dll.

  5. Dengan urutan di tangan Anda akan dapat membuat peta batasan Anda sendiri menggunakan program perangkat lunak yang sesuai (ada banyak yang komersial), mis. rangkaian EMBOSS perangkat lunak bioinformatika sumber terbuka.

Dalam kasus Anda, sebagian besar pekerjaan ini dilakukan untuk Anda karena situs AddGene memiliki dua peta pembatasan beranotasi yang menunjukkan hampir semua informasi yang Anda butuhkan. N.B. Satu peta memiliki lokasi situs enzim restriksi yang berguna, dan peta lainnya memiliki anotasi yang menunjukkan luas dan lokasi fragmen cacing dan gen reporter. Hanya dengan mengintegrasikan informasi dari kedua peta, saya dapat menyarankan satu solusi yang mungkin untuk pertanyaan Anda.


1. Manakah dari gen berikut yang membantu dalam mengidentifikasi sel yang berubah?
(a) plasmid
(b) penanda yang dapat dipilih
(c) gen struktural
(d) vektor

(a) Polimerase III
(b) EcoRI
(c) Ligase
(d) Taq polimerase

3. Temukan pernyataan yang salah tentang plasmid
(a) mereka berbentuk lingkaran
(b) mereka bereplikasi secara independen
(c) dapat dipindahtangankan
(d) mereka beruntai tunggal

4. Molekul DNA yang digunakan untuk mengintegrasikan gen asing untuk kloning disebut
(a) vektor
(b) pembawa
(c) pola
(d) transformator

5. Manakah dari berikut ini yang benar untuk plasmid pBR322 E.coli.?

(a) amp R dan tet R – gen resistensi antibiotik
(b) Hind III dan EcoRI – penanda yang dapat dipilih
(c) rop – penurunan tekanan osmotik
(d) ori – enzim restriksi asli

6. Plasmid Ti ditemukan di
(a) Agrobacterium
(b) Ragi sebagai plasmid 2mm
(c) Rhizobium dari akar tanaman polong-polongan
(d) Azotobacter

7. Replikasi DNA plasmid selain inisiasi dikendalikan oleh:
(a) gen bakteri
(b) gen mitokondria
(c) DNA plasmid
(d) tidak satupun dari ini

8. Antibiotik digunakan dalam rekayasa genetika. Mereka berguna
(a) untuk menjaga kultur bebas dari infeksi mikroba
(b) untuk memilih vektor yang sehat
(c) untuk mengidentifikasi situs awal replikasi
(d) sebagai penanda yang dapat dipilih

9. Molekul asam nukleat beruntai tunggal dan berlabel radio disebut
(a) plasmid
(b) vektor
(c) penyelidikan
(d) penanda yang dapat dipilih

10. Vektor yang hanya dapat mengkloning fragmen DNA kecil adalah
(a) kosmid
(b) plasmid
(c) Kromosom buatan ragi
(d) Kromosom buatan bakteri


2nd PUC Biology Biotechnology: Prinsip dan Proses Pertanyaan dan Jawaban Buku Teks NCERT

Pertanyaan 1.
Bisakah Anda membuat daftar 10 protein rekombinan yang digunakan dalam praktik medis? Cari tahu di mana mereka digunakan sebagai terapi (gunakan internet).
Menjawab:
Protein rekombinan yang digunakan dalam praktik medis sebagai terapi adalah sebagai berikut:

  • OKT-3, antibodi terapeutik digunakan untuk membalikkan penolakan transplantasi ginjal akut.
  • ReoPro adalah untuk pencegahan pembekuan darah.
  • Aktivator plasminogen jaringan (TPA) adalah untuk infark miokard akut.
  • Asparaginase adalah untuk pengobatan beberapa jenis kanker.
  • DNase adalah untuk pengobatan cystic fibrosis.
  • Insulin digunakan pada diabetes mellitus.
  • Faktor pembekuan darah VIII digunakan untuk pengobatan hemofilia A.
  • Faktor pembekuan darah IX adalah untuk pengobatan hemofilia B.
  • Vaksin hepatitis B adalah untuk pencegahan hepatitis B.
  • Faktor pertumbuhan yang diturunkan dari trombosit telah disetujui untuk diabetes/ulkus kulit. Ini juga merangsang penyembuhan luka.

Pertanyaan 2.
Buatlah bagan (dengan representasi diagram) yang menunjukkan enzim restriksi, substrat. DNA tempat ia bekerja, tempat pemotongan DNA, dan produk yang dihasilkannya.
Menjawab:

Pertanyaan 3.
Dari apa yang telah Anda pelajari, dapatkah Anda membedakan apakah enzim lebih besar atau DNA lebih besar dalam ukuran molekul? Bagaimana kamu tahu?
Menjawab:
Sel manusia bervariasi dalam ukuran dan volume. DNA tetap dalam ukurannya. Itu membuatnya agak sulit (seperti tidak mungkin) untuk menyatakan konsentrasi DNA. Hanya rentang yang dapat diberikan, dan informasi itu memiliki sedikit atau tidak ada nilai praktis dan bahkan lebih sedikit makna.

Pertanyaan 4.
Berapa konsentrasi molar DNA manusia dalam sel manusia? Konsultasikan dengan guru Anda.
Menjawab:
Konsentrasi molar adalah perbandingan jumlah mol zat terlarut dalam suatu larutan dibagi dengan volume larutan yang dinyatakan dalam liter.
Berat rata-rata pasangan basa DNA = 650 dalton (1 dalton sama dengan massa satu atom hidrogen atau 1,67 x 10 -24 gram)
Berat molekul untai ganda
Molekul DNA = Jumlah no. dari basepairs x 650 daltons
Genom manusia panjangnya 3,3 x 10 9 bp.
Oleh karena itu, berat genom manusia,
= 3,3 x 10 9 bp x 650 Da
= 3,59 x 10 -12 gram.
Konsentrasi molar DNA dapat dihitung dengan tepat.

Pertanyaan 5.
Apakah sel eukariotik memiliki endonuklease restriksi? Justifikasi jawaban Anda.
Menjawab:
Bioreaktor tangki berpengaduk memfasilitasi pencampuran dan ketersediaan oksigen. Ini mengontrol suhu dan pH di dalam bioreaktor.

Pertanyaan 6.
Selain sifat aerasi dan pencampuran yang lebih baik, keuntungan lain apa yang dimiliki bioreaktor tangki berpengaduk dibandingkan labu kocok?
Menjawab:
Labu kocok digunakan untuk menumbuhkan dan mencampur bahan yang diinginkan dalam skala kecil di laboratorium. Bioreaktor adalah wadah di mana bahan mentah secara biologis diubah menjadi produk tertentu oleh mikroba, sel tumbuhan dan hewan, dan enzimnya. Bioreaktor digunakan untuk produksi biomassa skala besar atau menjual produk dalam kondisi aseptik. Di sini kultur dalam jumlah besar (100-1000 liter) dapat diproses. Sebuah bioreaktor menyediakan kondisi optimal untuk mencapai produk yang diinginkan dengan menyediakan kondisi pertumbuhan optimal (suhu, pH, substrat, garam, vitamin, oksigen). Bioreaktor yang paling umum digunakan adalah jenis pengadukan.

Sebuah bioreaktor lebih menguntungkan daripada labu kocok. Ini memiliki sistem agitator untuk mencampur isinya dengan benar, sistem pengiriman oksigen untuk menyediakan oksigen, sistem kontrol busa, sistem kontrol suhu, sistem kontrol pH, dan port pengambilan sampel untuk menarik volume kecil kultur secara berkala.

Pertanyaan 7.
Kumpulkan 4 contoh sekuens DNA palindromik dengan berkonsultasi dengan guru Anda. Lebih baik coba buat barisan palindromik dengan mengikuti aturan pasangan basa.
Menjawab:

Pertanyaan 8.
Dapatkah Anda mengingat meiosis dan menunjukkan pada tahap apa DNA rekombinan dibuat?
Menjawab:
Meiosis I – Pachytene – Ketika nodul rekombinasi muncul setelah pembentukan kompleks sinaptonemal.

Pertanyaan 9.
Dapatkah Anda memikirkan dan menjawab bagaimana enzim reporter dapat digunakan untuk memantau transformasi sel inang oleh DNA asing selain penanda yang dapat dipilih? Jawab: Penanda yang dapat dipilih membantu mengidentifikasi sel inang yang berubah dan sel yang tidak berubah akan dihilangkan dan hanya sel yang berubah yang akan tumbuh. Sedangkan gen reporter adalah gen yang ekspresi fenotipiknya dapat dipantau dan dengan demikian melaporkan tentang aktivitas atau perubahan sebelum efek modifikasi, selain menghilangkan sel yang tidak ditransformasikan oleh penanda yang dapat dipilih. HLJelaskan secara singkat hal-hal berikut:
(a) Asal usul replikasi
(b) Bioreaktor
(c) Pemrosesan hilir
Menjawab:
(a) Asal replikasi (on): Salah satu komponen utama plasmid adalah urutan basa tempat replikasi dimulai. Ini disebut asal replikasi (on). Ini adalah bagian spesifik dari genom plasmid yang berfungsi sebagai sinyal awal untuk replikasi diri (untuk membuat salinan lain dari dirinya sendiri). Setiap bagian DNA ketika dikaitkan dengan urutan ini dapat dibuat untuk bereplikasi di dalam sel inang. Properti ini digunakan untuk membuat sejumlah salinan DNA terkait (atau sisipan DNA).

(b) Bioreaktor: Ini adalah wadah di mana bahan mentah secara biologis diubah menjadi produk tertentu oleh mikroba, sel tumbuhan dan hewan, dan enzimnya. Mereka diizinkan untuk mensintesis protein yang diinginkan yang akhirnya diekstraksi dan dimurnikan dari kultur. Kultur volume kecil biasanya digunakan di laboratorium untuk penelitian dan produksi produk dalam jumlah lebih sedikit. Namun, produksi skala besar produk dilakukan di bioreaktor’. Bioreaktor yang paling umum digunakan adalah bioreaktor tipe pengadukan (fermentor) yang memiliki ketentuan untuk kultur batch atau kultur kontinyu.

(c) Pengolahan hilir: Setelah pembentukan produk dalam bioreaktor, ia menjalani beberapa proses sebelum produk jadi siap dipasarkan. Proses ini termasuk pemisahan dan pemurnian produk yang secara kolektif disebut pemrosesan hilir. Produk tersebut kemudian menjalani pengujian kontrol kualitas dan disimpan dalam pengawet yang sesuai. Proses hilir dan uji kontrol kualitas berbeda untuk produk yang berbeda

Pertanyaan 11.
Jelaskan secara singkat
(a) PCR
(b) Enzim restriksi dan DNA
(c) Kitinase
Menjawab:
A. Amplifikasi DNA in vitro dengan siklus berulang pemisahan untai dan polimerisasi adalah PCR.
B. Enzim nuklease yang memotong DNA pada urutan yang unik disebut endonuklease restriksi. Mereka juga dikenal sebagai pisau molekuler, gunting molekuler, atau pisau bedah molekuler.
C. Kitinase adalah enzim pencernaan yang memecah tulang glikosidik dalam chi tin.

Pertanyaan 12.
Diskusikan dengan guru Anda dan cari tahu bagaimana membedakan antara
(a) DNA Plasmid dan DNA Kromosom
(b) RNA dan DNA
(c) Eksonuklease dan Endonuklease
Menjawab:

(a) DNA Plasmid dan DNA Kromosom

DNA plasmid DNA kromosom
(i) Ini adalah DNA ekstranuklear Itu adalah DNA nuklir
(ii) Ini membuat gen nonvital karies Ia memiliki gen vital
(iii) Sebuah sel bakteri dapat membawa satu sampai beberapa DNA plasmid. Sebuah sel bakteri hanya membawa satu kromosom DNA

RNA DNA
(i) Ini adalah asam ribonukleat Asam ribonukleat deqxy
(ii) Beruntai tunggal Standar ganda
(iii) RNA yang dihasilkan dari cetakan DNA DNA orang tua bertindak sebagai templat DNA
(iv) Basa nitrogen Urasil hadir sebagai pengganti timin, yang berpasangan dengan adenin. Timin berpasangan dengan adenin

(c) Eksonuklease dan Endonuklease

eksonuklease Endonuklease
(i) Ini memecah DNA dari ujungnya Itu memotong DNA dari dalam
(ii) Fragmen yang terpisah adalah nukleotida kecil Fragmen yang terpisah ini umumnya berukuran besar
(iii) Fragmen yang terpisah tidak dapat digunakan dalam rekayasa genetika Fragmen terpisah yang diinginkan digunakan dalam rekayasa genetika

2nd PUC Biology Biotechnology: Prinsip dan Proses Pertanyaan dan Jawaban Tambahan

2nd PUC Biology Biotechnology: Prinsip dan Proses Satu Tanda Pertanyaan

Pertanyaan 1.
Dengan mengamati pasangan yang diberikan mengisi bagian yang kosong

  1. Memotong DNA : Endonuklease restriksi :: Bergabung dengan DNA : …………………….
  2. Kitinase : Jamur :: Selulosa : …………………………..
  3. Protein : Protease :: RNA : ……………………………

Pertanyaan. 2.
DNA polimerase mana yang aktif pada suhu tinggi?
Menjawab:
Taq DNA polimerase aktif pada suhu tinggi.

Pertanyaan 3.
Endonuklease restriksi digunakan untuk memotong DNA pada tempat tertentu. Sebutkan endonuklease pertama yang diisolasi dari Escherichia coli.
Menjawab:
EcoRI

Pertanyaan. 4.
Tulis bentuk lengkap PCR. Enzim apa yang digunakan?
Menjawab:
Reaksi Rantai Polimerase (PCR).
Taq DNA digunakan dalam PCR.

Pertanyaan 5.
Sebutkan teknik yang digunakan untuk memisahkan fragmen DNA di laboratorium!
Menjawab:
Elektroforesis. (Dehli 2005)

Pertanyaan. 6.
DNA rekombinan pertama terbentuk di
Menjawab:
Pada Bakteri Salmonella Typhimurium.

Pertanyaan 7.
Tuliskan fungsi enzim restriksi pada sel bakteri?
Menjawab:
Bertanggung jawab untuk membatasi pertumbuhan bakteriofag.

Pertanyaan. 8.
Di mana Hind II memotong molekul DNA?
Menjawab:
Ini memotong molekul DNA pada urutan 6 pasangan basa tertentu.

Pertanyaan 9.
Mengapa plasmid dan bakteriofag biasa digunakan sebagai vektor kloning?
Menjawab:
Plasmid dan bakteriofag memiliki kemampuan untuk bereplikasi di dalam sel bakteri secara independen dari DNA kromosom.

Pertanyaan. 10.
Jenis muatan apa yang ditemukan dalam DNA?
Menjawab:
Muatan negatif.

Pertanyaan 11.
Apa itu pemrosesan hilir?
Menjawab:
Pemrosesan hilir adalah pemulihan produk dari sel rekayasa genetika yang tumbuh sepenuhnya, pemurnian dan pengawetannya

Pertanyaan. 12.
Apa itu elektroforesis?
Menjawab:
Elektroforesis adalah teknik yang digunakan di laboratorium untuk memisahkan makromolekul berdasarkan ukurannya.

Pertanyaan 13.
Apa itu terapi gen?
Menjawab:
Ini adalah penggantian gen yang rusak dengan gen sehat dan fungsional yang normal. Metode ini membantu mengatasi efek berbagai gangguan seperti anemia sel sabit, alkaptonuria, SCID, buta warna dll.

Pertanyaan. 14.
Sebutkan teknik di mana kita harus mengisolasi segmen DNA.
Menjawab:
Elektroforesis.

Pertanyaan 15.
Apa itu amplifikasi?
Menjawab:
Ini adalah proses membuat banyak salinan segmen gen/DNA yang diinginkan.

Pertanyaan 16.
Apa itu protein rekombinan?
Menjawab:
Ini adalah senyawa biokimia atau protein berguna yang diproduksi di dalam sel inang heterolog dengan metode bioteknologi rekombinan.

Pertanyaan 17.
Apa itu bioreaktor atau fermentor?
Menjawab:
Merupakan wadah di mana proses biokimia dilakukan dengan menggunakan sel hidup dan media pertumbuhannya.

Pertanyaan 18.
Apa yang dimaksud dengan biokonversi?
Menjawab:
Ini adalah proses di mana bahan mentah secara biologis diubah menjadi produk tertentu menggunakan mikroba, sel tumbuhan atau hewan dan atau enzimnya.

Pertanyaan 19.
Mengapa gen resistensi antibiotik digunakan sebagai penanda yang dapat dipilih untuk E.Coli?
Menjawab:
Karena E.Coli tidak memiliki gen resistensi antibiotik, gen resistensi antibiotik digunakan dari luar sebagai penanda yang dapat dipilih.

2nd PUC Biology Biotechnology: Prinsip dan Proses Dua Tanda Pertanyaan

Pertanyaan 1.
Sebutkan ilmuwan yang membangun DNA rekombinan. Nama bakteri dari mana mereka mengisolasi gen.
Menjawab:
Stanley Cohen dan Herbert Boyer adalah orang pertama yang membangun DNA rekombinan. Mereka mengisolasi gen dari bakteri. Salmonella typhimurium.

Pertanyaan 2.
Beberapa celah telah ditinggalkan dalam tabel berikut yang menunjukkan istilah-istilah tertentu dan artinya, mengisi celah-celah tersebut.
Arti Istilah
(i) ………….. Urutan non-coding dalam DNA eukariotik
(ii) ………….. Teknik yang digunakan dalam menyelesaikan perselisihan paternitas
(iii) Endonuklease restriksi …………..
(iv) Plasmid …………..
(v) Transgenik …………..
(vi) Urutan nukleotida dengan defisiensi basa tunggal …………….

Pertanyaan 3.
Sebutkan teknik tertentu dalam bioteknologi yang langkah-langkahnya ditunjukkan pada gambar gunakan gambar untuk meringkas teknik dalam tiga langkah.
Menjawab:

  • Tempat template
  • sidik jari DNA
  • DNA ekstranuklear
  • Organisme yang memiliki gen organisme lain yang diperoleh melalui rekayasa genetika.
  • Polimorfisme nukleotida tunggal. (SNP)

Pertanyaan 3.
Sebutkan teknik tertentu dalam bioteknologi yang langkah-langkahnya ditunjukkan pada gambar gunakan gambar untuk meringkas teknik dalam tiga langkah.
Menjawab:

(a) Teknologi rekombinan
(B)

  • Pemotongan dan isolasi gen manusia
  • Penggabungan gen manusia ke dalam plasmid untuk menghasilkan DNA rekombinan atau plasmid
  • Penggabungan plasmid rekombinan ke dalam bakteri untuk mendapatkan produk gen

Pertanyaan 4.
Perhatikan diagram tersebut dan jawablah pertanyaan berikut:
(i) Dari apa T1– plasmid diperoleh?
(ii) Sebutkan enzim yang terlibat dalam langkah I
(iii) Apa yang terjadi pada langkah II
(iv) Tanaman yang dihasilkan disebut hibrida atau transgenik
(v) Akankah tanaman yang dihasilkan memiliki gen lain bersama dengan gen yang diinginkan? Ya atau Tidak jelaskan.
Menjawab:

(i) Agrobacterium tumefaciens
(ii) Endonuklease restriksi
(iii) Penggabungan gen dalam T1 plasmid di daerah T-DNA.
(iv) Transgenik
(v) Ya. Gen penanda yang dapat dipilih yang seringkali merupakan gen resistensi antibiotik

Pertanyaan 5.

Pelajari hubungan fragmen DNA yang ditunjukkan di atas
(i) Beri nama “a” DNA dan “b” DNA
(ii) Sebutkan enzim restriksi yang mengenali palindrom ini
(iii) Sebutkan enzim yang dapat menghubungkan kedua fragmen DNA ini (CBSE 2008)
Menjawab:
(i) (a) – DNA vektor
(b) – DNA asing

Pertanyaan 6.
Jelaskan pentingnya
(a) Ori
(b) amp R dan
(c) rop dalam vektor E. Coli ditunjukkan di bawah ini (CBSE 2008)
Menjawab:

  • Ori – Asal usul replikasi
  • amp R – gen resistensi antibiotik ampisilin
  • rop – gen yang menghasilkan protein yang terlibat dalam replikasi plasmid.

Pertanyaan 7.
Sifat yang menarik dari enzim restriksi adalah pemotongan dan penempelan molekul. Enzim restriksi biasanya mengenali struktur simetris

Perhatikan bahwa untaian atas sama dengan untaian bawah tetapi terbaca mundur. Ketika enzim memotong untai antara G dan A, ia meninggalkan rantai yang menjorok

(A) Apa urutan simetris DNA yang dikenal sebagai?
(B) Apa arti penting dari rantai yang menggantung ini?
(C) Sebutkan enzim restriksi yang memotong untai antara G dan A.
Menjawab:
(A) Barisan palindromik
(B) ujung lengket
(C) Eco RI

Pertanyaan. 8.
Apa itu DNA ligase?
Menjawab:
DNA ligase adalah jenis enzim tertentu, ligase yang memfasilitasi penggabungan untaian DNA bersama-sama dengan mengkatalisis pembentukan ikatan fosfodiester.

Pertanyaan 9.
Apa itu vektor kloning? Fungsi apa yang dilakukan oleh vektor-vektor ini?
Menjawab:
Vektor kloning adalah organisme pada DNA mereka yang dapat berkembang biak secara independen dari DNA inang dan meningkatkan jumlah salinannya bersama dengan DNA asing yang melekat padanya. Fungsinya adalah:

  • Mereka membantu menghubungkan DNA asing/asing dengan inangnya
  • Mereka juga membantu dalam pemilihan rekombinan dari non-rekombinan

Pertanyaan. 10.
Apa itu Ti-plasmid?
Menjawab:
Ti atau tumor-inducing plasmid adalah plasmid yang merupakan bagian dari peralatan genetik yang digunakan Agrobacterium tumefacient untuk mentransduksi materi genetiknya ke tanaman.

Pertanyaan 11.
Urutan nukleotida palindromik memiliki arti penting dalam teknologi DNA rekombinan. Menjelaskan. Berikan contoh untuk urutan DNA palindromik.
Menjawab:
Palindrom dalam DNA adalah urutan pasangan basa yang membaca sama pada dua untai ketika orientasi membaca tetap sama. Setiap endonuklease restriksi mengenali sekuens nukleotida palindromik tertentu dan memotong untai DNA agak jauh dari pusat situs palindrom, tetapi di antara dua basa pada untai yang berlawanan.
Contoh DNA palindrom adalah
5′ – GAATTC – 3′
3′ – CTTAAG – 5′

Pertanyaan. 12.
Sebutkan ilmuwan yang menemukan metode sintesis DNA buatan.
Menjawab:
Hadiah Nobel dalam bidang fisiologi pada tahun 1968 dianugerahkan bersama kepada Robert W. Holley, Hargobind Khorana, dan M. Nirenberg atas interpretasi mereka terhadap kode genetik.

2nd PUC Biology Biotechnology: Prinsip dan Proses Tiga Tanda Pertanyaan

Pertanyaan 1.
Diberikan di bawah ini adalah langkah-langkah yang berbeda dalam teknologi DNA rekombinan. Atur mereka sesuai dengan urutan kemunculannya.
A. Mentransfer DNA rekombinan ke dalam inang.
B. Ekstraksi produk.
C. Fragmentasi DNA oleh endonuklease restriksi
D. Ligasi fragmen DNA menjadi vektor.
e. Isolasi DNA.
F. Membudayakan langit-langit inang dalam skala sedang dalam skala besar.
G. Isolasi fragmen DNA yang diinginkan.
Menjawab:
A. Isolasi DNA.
B. Fragmentasi DNA oleh endonuklease restriksi
C. Isolasi fragmen DNA yang diinginkan.
D. Ligasi fragmen DNA menjadi vektor.
e. Mentransfer DNA rekombinan ke dalam inang.
F. Kultur sel inang dalam skala sedang dalam skala besar.
G. Ekstraksi produk.

Pertanyaan 2.
Gambarkan secara diagram vektor kloning E Coli pBR 322 yang menunjukkan situs restriksi.
Menjawab:

Pertanyaan 3.
Gambarlah diagram berlabel bioreaktor tangki berpengaduk.
Menjawab:

Pertanyaan 4.
Bacalah urutan basa untai DNA tertentu berikut dan jawablah pertanyaan-pertanyaan berikut.

(i) Apa yang disebut “urutan Palindromik” dalam bNA?
(ii) Tulis urutan nukleotida Palindromic yang ditunjukkan pada untai DNA yang diberikan dan sebutkan enzim yang akan mengenali urutan tersebut.
(iii) Nyatakan signifikansi enzim yang mengidentifikasi urutan nukleotida palindromik.
(AI – 2008)
Menjawab:
(i) Urutan palindromik DNA adalah urutan pasangan basa yang terbaca sama pada dua untai, bila orientasi pembacaan tetap sama, yaitu dalam arah 5′ → 3′.
(ii) 5′ GAA TT C – 3′
3′ CTTA AG – 5′
Urutan ini dibatasi oleh enzim restriksi Eco RI
(iii) Enzim yang mengidentifikasi urutan nukleotida palindromik memotong untaian antara 2 basa yang sama, lebih sering menghasilkan ujung lengket sehingga berguna dalam pembentukan DNA rekombinan.

2nd PUC Biology Biotechnology: Prinsip dan Proses Lima Tanda Pertanyaan

Pertanyaan 1.
Jelaskan secara rinci komponen bioreaktor tangki berpengaduk sederhana bersama dengan diagram berlabel.
Menjawab:
Sebuah bioreaktor tangki berjenjang biasanya bejana silinder dengan dasar melengkung untuk memfasilitasi pencampuran konten. Pengaduk memfasilitasi pencampuran yang merata dan ketersediaan oksigen di seluruh bioreaktor.

Bioreaktor memiliki sistem agitator, sistem pengiriman oksigen bersama dengan sistem kontrol busa, sistem kontrol suhu, sistem kontrol pH dan port pengambilan sampel untuk menghilangkan volume kecil kultur secara berkala. Ini memberikan kondisi pertumbuhan optimum pH, suhu, substrat, oksigen dll untuk mencapai produk yang diinginkan.

Pertanyaan. 2.
Apa itu klon? Berikan persiapannya, diekstraksi dan dimurnikan.
Menjawab:
Organisme atau sel atau kelompok organisme, yang dihasilkan secara aseksual dari nenek moyang, yang secara genetik mereka miliki.

1. Kloning gen: Langkah-langkah berikut digunakan oleh kloning gen:

1. Persiapan gen: DNA yang diekstraksi dari suatu organisme, dengan gen yang diinginkan dipotong menjadi potongan-potongan ukuran gen dengan enzim restriksi.

2. Penyisipan ke dalam vektor: Plasmid bakteri dipotong dengan enzim restriksi yang sama. Plasmid adalah lingkaran kecil DNA dalam sel bakteri yang secara alami ada di samping DNA bakteri lainnya.

3. Transformasi sel inang: Plasmid rekombinan kemudian ditransfer ke bakteri baik menggunakan elektroforasi. Plasmid cukup kecil untuk melewati lubang ke dalam sel. Namun, alih-alih menggunakan listrik untuk membuat lubang pada bakteri, itu dilakukan dengan mengubah suhu antara panas dan dingin. Bakteri ditumbuhkan pada cawan kultur dan dibiarkan tumbuh menjadi koloni. Semua koloni pada semua lempeng disebut perpustakaan gen.

2. Kloning tanaman: Kultur jaringan tanaman adalah metode perbanyakan yang telah populer sebagai alternatif untuk kloning.

Tanaman dapat dikloning secara artifisial menggunakan kultur jaringan. Perbanyakan vegetatif bekerja karena ujung stek membentuk massa sel-sel yang tidak terspesialisasi yang disebut kalus, kalus tersebut akan tumbuh membelah dan membentuk berbagai sel khusus yang akhirnya membentuk tumbuhan baru.

Pertanyaan 3.
(a) Jika enzim restriksi harus memotong DNA, DNA harus dalam bentuk murni, yaitu bebas dari RNA dan protein terkait. Bagaimana pencapaiannya?
(b) Gambarkan hanya secara diagram langkah-langkah dalam teknologi DNA rekombinan (r DNA).
Menjawab:
(a) RNA dihilangkan dengan menggunakan enzim yang disebut ribonuklease (RNases) Protein dihilangkan dengan menggunakan enzim protease.
(B)

Pertanyaan 4.
(a) Tunjukkan hanya secara diagram tiga langkah dalam reaksi berantai polimerase,
(b) Bagaimana amplifikasi berulang dicapai dengan menggunakan metode ini?
Menjawab:

(b) Amplifikasi berulang dicapai dengan menggunakan polimerase DNA termostabil, yang diisolasi dari bakteri Thermus aquaticus. Ini tetap aktif selama suhu tinggi yang digunakan untuk denaturasi DNA untai ganda.

Pertanyaan 5.
Buatlah representasi diagram untuk menunjukkan enzim restriksi, DNA substrat pada u yang bertindak sebagai tempat pemotongan DNA dan produk yang dihasilkannya.
Menjawab:


Laporan pemeriksa

Banyak kandidat mengidentifikasi lingkaran DNA sebagai plasmid, meskipun beberapa menyebutnya mRNA atau menggunakan nama enzim.

Ligase sering diberikan tetapi sangat sedikit yang menggunakan istilah DNA ligase, seperti terlihat dalam Pernyataan Penilaian 4.4.8 dari panduan biologi IB. Sangat sedikit yang berbicara tentang menyegel torehan atau celah, atau disebutkan bergabung dengan ikatan gula fosfat. Tidak disadari bahwa ujung-ujung lengket telah bergabung, artinya pasangan basa komplementer telah terjadi.

Pertanyaan ini dijawab dengan buruk. Contoh aktual (bukan hipotetis atau tidak berhasil) dari transfer gen diperlukan. Rincian transfer seperti sumber gen dan spesies transgenik jarang disebutkan. Kadang-kadang, potensi manfaat yang disebutkan dan kemungkinan bahaya dari transfer gen tidak berhubungan dengan contoh yang diberikan.

Transfer gen juga dikacaukan dengan kloning, perkawinan silang, IVF, mutasi gen atau bahkan transplantasi sumsum tulang. Beberapa kandidat hanya memberikan jawaban yang sangat umum yang tidak mendapatkan nilai. Yang lain membiarkan ruang jawaban sepenuhnya kosong.


Mentransfer Gen

A vektor adalah molekul DNA pembawa di mana gen yang diinginkan dapat dimasukkan.

Paling umum, vektor ini adalah plasmid. Ini adalah bagian kecil, ekstra-kromosom, DNA melingkar yang sering ditemukan pada bakteri selain DNA fungsionalnya.

Plasmid dimodifikasi sehingga memiliki dua atau lebih gen untuk resistensi antibiotik. Mereka juga harus mengandung urutan yang dapat dikenali oleh enzim restriksi yang sama yang digunakan untuk memotong fragmen. Situs yang dipotong harus di salah satu gen untuk resistensi antibiotik.

Potongan Plasmid oleh Bam HI:

Bagaimana gen dimasukkan ke dalam plasmid:

Potong genom dengan enzim restriksi (RE) dan campur dengan plasmid yang juga telah dipotong dengan RE yang sama sehingga ujung lengket fragmen dan plasmid saling melengkapi. Mudah-mudahan, beberapa fragmen akan memasukkan ke dalam DNA plasmid sebelum salah satu segmen bergabung dengan dirinya sendiri.

Fragmen ditambahkan ke plasmid dengan kemungkinan hasil berikut:

  1. Plasmid bergabung kembali, gen tetrasiklin sekarang utuh.
  2. Fragmen bergabung dengan plasmid. Gen resistensi tetrasiklin terputus fragmen tidak mengandung gen yang diinginkan.
  3. Fragmen bergabung dengan plasmid. Gen tetrasiklin terputus kali ini fragmen memang mengandung gen yang diinginkan.
  4. Fragmen bergabung dengan dirinya sendiri.

Beberapa plasmid sekarang akan mengandung DNA rekombinan pecahan.

Plasmid lain, bagaimanapun, tidak akan mengandung fragmen. Jika plasmid adalah rekombinan maka salah satu gen resistensi antibiotik (misalnya, untuk tetrasiklin) akan telah terganggu. Namun, gen lain untuk resistensi antibiotik (misalnya untuk ampisilin) ​​akan tetap utuh.

Masih ada satu masalah - bagaimana Anda mengidentifikasi plasmid rekombinan dengan gen yang diinginkan di dalamnya?

Mengisolasi gen yang diinginkan di koloni yang tepat

Anda perlu tahu DNA-nya urutan dasar gen untuk protein yang diinginkan sehingga bagian dari urutan basa itu dapat berlabel radioaktif.

Bagian DNA dengan urutan basa yang benar ini disebut a menguji.

DNA pada bakteri adalah "membuka ritsleting" sehingga menjadi untai tunggal dan probe akan anil (melekat) jika ada basa komplementer.

Probe ditambahkan dan menempel pada fragmen pelengkap yang benar. Fragmen yang benar sekarang dapat diidentifikasi, karena bersifat radioaktif.

Semua bakteri dalam sebuah koloni telah diproduksi oleh replikasi satu individu. Oleh karena itu, mereka semua akan memiliki gen yang sama untuk menghasilkan protein yang sama. Koloni ini kemudian bisa menjadi terisolasi dan dikalikan sehingga protein disintesis dan dapat dipanen untuk digunakan lebih lanjut.

Bakteri dapat digunakan dengan cara ini untuk memproduksi insulin manusia bagi penderita diabetes yang tidak memproduksi sendiri.


1. Mengapa penting untuk menemukan enzim yang akan memotong plasmid hanya pada satu tempat? Apa yang bisa terjadi jika plasmid dipotong di lebih dari satu tempat? Anda hanya ingin membuka DNA melingkar sehingga DNA manusia dapat dimasukkan ke dalam lingkaran. Jika enzim memotong di banyak tempat, maka Anda akan mendapatkan banyak fragmen.

2. Enzim restriksi apa yang Anda gunakan? __ beberapa mungkin __ Tanyakan kepada kelompok lain apa yang mereka gunakan dan bandingkan plasmid transgenik akhir. Mengapa mungkin ada beberapa panjang yang berbeda? itu tergantung di mana enzim memotong DNA manusia, itu bisa membuat potongan yang lebih panjang

3. Mengapa penting untuk membuang enzim yang memotong plasmid di tempat replikasi? jika Anda ingin DNA Anda disalin, maka Anda memerlukan bakteri untuk dapat bereproduksi, situs replikasi diperlukan

4. Mengapa penting untuk memotong plasmid dan DNA manusia dengan enzim restriksi yang sama? ujung-ujungnya harus cocok sehingga Anda bisa menyatukannya

5. Apakah enzim restriksi ada secara alami pada organisme? Jika demikian, apa tujuan mereka? mereka menyerang dan menghancurkan penyerbu, seperti virus

6. Mengapa enzim restriksi yang menciptakan ujung "tumpul" tidak berguna dalam rekombinasi seperti enzim yang membuat ujung lengket? ujung tumpul tidak akan menempel pada DNA lain

7. Dalam kegiatan tersebut, Anda mensimulasikan pembuatan organisme bakteri rekombinan. Untuk setiap bahan berikut, tunjukkan apa yang mereka wakili?
Gunting ______ enzim restriksi_ ___
Pita ______ ligase _________


Bagaimana organisme dimodifikasi secara genetik?

Rekombinasi adalah proses di mana gen baru dimasukkan ke dalam DNA bakteri "Plasmid". DNA perlu dipotong dengan enzim yang disebut enzim restriksi. Enzim restriksi yang digunakan harus memiliki bentuk tertentu yang memungkinkan untuk bergerak sepanjang DNA yang akan dipotong. Enzim restriksi mencari titik tertentu dalam urutan DNA untuk memotong DNA. Ketika enzim restriksi dipotong, ia meninggalkan "ujung lengket" yang membantu gen baru untuk menempel pada titik itu. Enzim lain digunakan untuk menempelkan segmen DNA baru yang disebut "DNA ligase". Bakteri rekayasa genetika dikultur dan banyak salinan baru dari bakteri dengan gen baru ditumbuhkan. Modifikasi genetik dapat dilakukan pada tumbuhan dan hewan.

Video di bawah ini menggambarkan mekanisme rekombinasi.

Agrobakteri adalah bakteri yang menggunakan transfer gen Horizontal (HGT). HGT adalah transfer DNA antara genom yang berbeda [Pop up: Genom adalah set lengkap materi genetik yang ada dalam suatu organisme]. HGT dapat terjadi pada bakteri melalui transformasi, konjugasi dan transduksi. Namun, HGT juga mungkin terjadi antara eukariota dan bakteri meskipun mekanisme transfer ini tidak dipahami dengan baik.

Bakteri memiliki tiga cara untuk mentransfer bakteri antar sel:

  1. Transformasi: Penyerapan dan penggabungan DNA eksternal ke dalam sel sehingga mengakibatkan perubahan genom
  2. Konjugasi: Pertukaran materi genetik melalui kontak sel ke sel dua sel bakteri. Sebuah untai DNA plasmid ditransfer ke sel penerima dan sel donor kemudian mensintesis DNA untuk menggantikan untai yang ditransfer ke sel penerima.
  3. Transduksi: Segmen DNA bakteri dibawa dari satu sel bakteri ke sel bakteri lainnya oleh bakteriofag. Bakteriofag menginfeksi sel bakteri dan mengambil DNA bakteri. Ketika fag ini menginfeksi sel lain, ia mentransfer DNA bakteri ke sel baru. The bacteria can then become a part of the new host cell.

Agrobacterium also has the ability to transfer DNA between itself and plants and is therefore commonly used in genetic engineering. The process of using Agrobacterium for genetic engineering is illustrated in the diagram below.

Summary of process illustrated in the diagram (above):

  • The agrobacterium cell contains a bacterial chromosome and a Tumor inducing plasmid- "Ti Plasmid".
  • The Ti plasmid is removed from the agrobacterium cell and a restriction enzyme cleaves the T-DNA restriction site.
  • Next foreign DNA, which is also cleaved by the same enzyme, is inserted into the T DNA at the site that was cleavage site.
  • The modified plasmid is then reinserted in the agrobacterium and the bacterium inserts the TDNA, which now carries a foreign gene into the plant cell.
  • The plant cell is then cultured and results in a new plant that has the foreign DNA trait.

The following video illustrates the process of using Agrobacterium for genetic engineering.


Hands-on Activity Bacteria Transformation

Unit berfungsi sebagai panduan untuk konten atau area subjek tertentu. Bersarang di bawah unit adalah pelajaran (berwarna ungu) dan kegiatan langsung (berwarna biru).

Perhatikan bahwa tidak semua pelajaran dan kegiatan akan ada di bawah satu unit, dan sebagai gantinya mungkin ada sebagai kurikulum "mandiri".

Buletin TE

Ringkasan

The Enterococcus faecalis bacterium lives in the human gut.

Koneksi Rekayasa

Bacteria are the most common organisms modified by genetic engineers due to the simple structures of bacteria cells compared to those of eukaryotic cells. Engineers are able to add genes to bacteria using recombinant plasmids, which enable the bacteria to produce the desired beneficial proteins. Students use a paper model to simulate this real-life process used by bio-technicians.

Tujuan pembelajaran

Setelah kegiatan ini, siswa diharapkan dapat:

  • Model and describe the process used by engineers to modify the genome of bacteria.
  • Explain why bacteria are genetically modified more often than other organisms.
  • Discuss possible applications for genetically modified bacteria.

Standar Pendidikan

Setiap MengajarTeknik pelajaran atau kegiatan berkorelasi dengan satu atau lebih standar pendidikan sains, teknologi, teknik, atau matematika (STEM) K-12.

Semua 100.000+ standar STEM K-12 tercakup dalam MengajarTeknik dikumpulkan, dipelihara dan dikemas oleh Jaringan Standar Prestasi (ASN), sebuah proyek dari D2L (www.achievementstandards.org).

Di ASN, standar terstruktur secara hierarkis: pertama berdasarkan sumber misalnya, menurut negara bagian dalam sumber menurut jenis misalnya, sains atau matematika dalam tipe demi subtipe, lalu berdasarkan kelas, dll.

NGSS: Standar Sains Generasi Selanjutnya - Sains

HS-LS1-1. Construct an explanation based on evidence for how the structure of DNA determines the structure of proteins which carry out the essential functions of life through systems of specialized cells. (Grades 9 - 12)

Apakah Anda setuju dengan keselarasan ini? Terima kasih atas tanggapan Anda!

Alignment agreement: Thanks for your feedback!

Alignment agreement: Thanks for your feedback!

All cells contain genetic information in the form of DNA molecules. Genes are regions in the DNA that contain the instructions that code for the formation of proteins, which carry out most of the work of cells.

Alignment agreement: Thanks for your feedback!

Alignment agreement: Thanks for your feedback!

Asosiasi Pendidik Teknologi dan Teknik Internasional - Teknologi
  • Medical technologies include prevention and rehabilitation, vaccines and pharmaceuticals, medical and surgical procedures, genetic engineering, and the systems within which health is protected and maintained. (Grades 9 - 12) More Details

Apakah Anda setuju dengan keselarasan ini? Terima kasih atas tanggapan Anda!

Apakah Anda setuju dengan keselarasan ini? Terima kasih atas tanggapan Anda!

Standar Negara
Texas - Science
  • describe how techniques such as DNA fingerprinting, genetic modifications, and chromosomal analysis are used to study the genomes of organisms. (Grades 9 - 11) More Details

Apakah Anda setuju dengan keselarasan ini? Terima kasih atas tanggapan Anda!

Daftar Bahan

  • gunting
  • tape, 3 small pieces , one per group these represent plasmid DNA and mammal DNA containing the insulin gene helpful to print page 1 on different colored paper than page 2 , one per group , one per student
  • stapler (can be shared among groups)

Lembar Kerja dan Lampiran

Lebih Banyak Kurikulum Seperti Ini

Students learn how engineers apply their understanding of DNA to manipulate specific genes to produce desired traits, and how engineers have used this practice to address current problems facing humanity. Students fill out a flow chart to list the methods to modify genes to create GMOs and example a.

As a class, students work through an example showing how DNA provides the "recipe" for making human body proteins. They see how the pattern of nucleotide bases (adenine, thymine, guanine, cytosine) forms the double helix ladder shape of DNA, and serves as the code for the steps required to make gene.

Students learn about mutations to both DNA and chromosomes, and uncontrolled changes to the genetic code. They are introduced to small-scale mutations (substitutions, deletions and insertions) and large-scale mutations (deletion duplications, inversions, insertions, translocations and nondisjunction.

Students reinforce their knowledge that DNA is the genetic material for all living things by modeling it using toothpicks and gumdrops that represent the four biochemicals (adenine, thiamine, guanine, and cytosine) that pair with each other in a specific pattern, making a double helix. Student teams.

Pre-Req Knowledge

A basic understanding of protein synthesis and DNA's role in the cell/body is helpful so students can follow how changes in DNA result in major changes in the characteristics of organisms.

Pendahuluan/Motivasi

How big are bacteria? (Answer: most are only a few micrometers. Micrometers are one millionth of a meter. 1 cm = 10,000 micrometers 1 mm = 1,000 micrometers) Bacteria are so small that most are less than one-tenth of the diameter of a human hair.

How many different species of bacteria exist? (Answer: Estimates vary from 10 million to 1 billion species.) So far, we have only discovered less than 10,000 different species, but some scientists estimate that as many as 1 billion different species of bacteria may exist on Earth! How prolific are bacteria? Bacteria are so plentiful that a 20-ounce bottle of water may contain up to 600 million bacteria!

Bacteria are everywhere, and most of the time they are harmless. In fact, many are beneficial to people because they are useful and necessary to a healthy human body and environment. What are some examples of these "good" bacteria? (Possible answers: E.coli within the intestines of mammals, bacteria within the soil, bacteria used to make foods such as yogurt.) Without bacteria, we would not be able to digest food or produce some of our favorite foods such as yogurt and cheese. The bacteria we might generally call "bad" for us include those responsible for causing illnesses like food poisoning.

Do you think genetic engineers could use and modify bacteria for any purpose? (Answer: Yes) Bacteria are the most commonly modified organisms. Let's look at how we can modify these bacteria and why we would want to modify them.

Prosedur

Bacteria can be adapted to produce a number of useful materials. Because of the simple structures of bacterial cells, they are the most commonly modified organisms. Many times, and in this activity, a gene is simply added to the bacteria, causing the bacteria to be able to produce a useful protein, such as insulin. Other changes to bacteria can reconfigure the cellular respiration product to create desirable byproducts such as diesel or plastic molecules instead of the usual byproduct, such as carbon dioxide.

The common method used for genetically modifying bacteria is to use recombinant plasmids. Plasmids are circular pieces of DNA when placed near bacteria, the plasmid is absorbed and incorporated into the bacterial cell. Once inside the bacteria, the plasmid is treated the same as the bacteria's original DNA. This means that the bacteria will use this new DNA from the plasmid to create proteins, and the plasmid will be replicated when the cell divides.

The process of creating genetically modified bacteria used in this activity is one of the simplest methods. First, a desired gene must be selected from some (any) organism, that is, the gene that codes for the creation of insulin protein, and removed from the DNA of that organism. Genes are removed using restriction enzymes. These enzymes search for specific nucleotide sequences in the DNA, called recognition sites, where they "cut" the DNA by breaking certain bonds. When the bonds are broken in a staggered manner it creates "sticky ends." If the enzyme breaks the bond to create a straight cut, the ends are called "blunt ends." The next step is to use the same restriction enzyme to cut open the plasmid.

The isolated gene is now placed where the plasmid was cut, and they are bonded together using another enzyme called ligase. Now a recombinant plasmid has been produced. The final step is to get the plasmid into a bacteria cell. Sometimes simply placing the bacteria in the correct environment is enough to artificially induce the bacteria to intake the recombinant DNA, otherwise some special method may be required if the plasmid is too large to cross the bacteria's cell membrane. Figure 1.shows a diagram of the entire process. Figure 1. The process to build a recombinant plasmid to modify bacteria.

  • Gather materials and make copies of the Modeling Bacteria Transformation Worksheet, one per group, and Assessment Questions, one per person.
  • Make copies of the DNA Sequences for Cut-Outs, one per group it is helpful if the plasmid DNAs (page 1) are printed on different colored paper from the mammal DNAs (page 2) to help distinguish them during the activity. Then cut the DNA sequences into strips.
  • If time is short, tape the cut-out plasmid DNA into circles with the DNA sequence facing outward. Otherwise, have students do this in step 2.

  1. Divide the class into groups of two students each. Hand out to each group a worksheet and its two strips of DNA sequences, pointing out which will be used to create the plasmid, and which is the mammal DNA containing the insulin gene.
  2. Direct groups to tape together the ends of the plasmid DNA to form a circular piece of DNA (see Figure 2) so that the printed sequence is visible on the outside of the plasmid. This is the initial plasmid that will be modified with the insulin gene. Figure 2. Illustration of the circular DNA created in step 2.


Question about cutting gene in Plasmid - Biology

Cut the DNA fragment and plasmid using the same restriction enzyme. Add guanines to DNA fragment blunt ends and terminal transferase, to produce a single chain of guanines to both the blunt ends of the plasmid vector. Add cytosines to vector blunt ends, to produce a single chain of cytosines to both blunt ends of the DNA fragment.
Mix the cut plasmid and cut DNA fragment together for recombination to occur. Single chain guanine will bind to single chain cytosine by complementary base pairing. Add ATP and DNA ligase to seal the nicks by forming phosphodiester bonds in the sugar backbone.
Add recombinant DNA to bacteria culture for transformation to take place. Use heat shock and add calcium chloride to facilitate uptake of recombinant DNA.

From here on, answer is question specific.
Culture bacteria in agar plate containing ampicillin (assuming original plasmid had ampicillin resistant gene). Bacteria that has taken up the plasmid vector, whether reannealed or with the foreign DNA will be resistant to ampicillin and grow on the agar plate. .


Masalah: You would like to clone the DNA of interest into the pDiddy cloning plasmid. You have the following restriction map of the region that includes the DNA of interest and the plasmid (E = EcoRI, H = HindIII, X = XbaI, S = SphI, N = NotI)Which restriction enzyme(s) would you choose to clone the DNA of interest into the cloning vector?A. SB. E and HC. S and ND. X and N

In DNA cloning, the primary goal is to successfully insert the DNA of interest as a plasmid to a viable cell. This would then make the gene available to be induced for expression. In inserting the target DNA, the function of restriction enzymes is involved. These enzymes are endonucleases that cut the target DNA from the source strand and are the same endonucleases to cut the restriction sites with the same sequence so it can serve as the insertion point.

Problem Details

You would like to clone the DNA of interest into the pDiddy cloning plasmid. You have the following restriction map of the region that includes the DNA of interest and the plasmid (E = EcoRI, H = HindIII, X = XbaI, S = SphI, N = BukanSAYA)

Which restriction enzyme(s) would you choose to clone the DNA of interest into the cloning vector?


Tonton videonya: #Rekayasa Genetika - Kloning Gen ke Bakteri (Oktober 2022).